重組腸激酶
Recombinant Enterokinase
產(chǎn)品貨號： BEK0003
儲存溫度： -20℃以下
來源：E.coli
1.產(chǎn)品簡介
重組腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段。該酶經(jīng)純化，純度高，特異性高，不含其他蛋白酶。腸激酶可以切割含
有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 -天冬氨酸 - 賴氨酸（DDDDK）?？梢栽谳^寬 pH 范
圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內(nèi)有效切割融合蛋白。腸激酶可去除位于蛋白質(zhì) N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標(biāo)
簽。
2.應(yīng)用范圍
腸激酶具有高度專一性，水解效率高的特點，它被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā)，其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重
組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。本重組表達產(chǎn)品攜帶
his 標(biāo)簽，便于切割目標(biāo)蛋白后除去，保證酶切的可控性和特異性。
本產(chǎn)品為采用重組大腸表達的高純度、 高活性的重組牛源腸激酶，適用范圍廣（4-45℃， pH4.5-9.5），并且在各種
去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性重組抗體的質(zhì)量檢測；蛋白質(zhì)C-末端氨基酸的測定；其它重組多肽類物質(zhì)的生
產(chǎn)。
3.產(chǎn)品優(yōu)勢
? 本公司生產(chǎn)的腸激酶，其序列與動物腸激酶相同，可以替代動物源性腸激酶用于各個領(lǐng)域；
? 酶純度高，活性高，無外源蛋白和動物源性蛋白污染；
? 產(chǎn)品以干粉形式存在，便于運輸和保存；
? 每批次可生產(chǎn)公50g以上，保證批間差和批次穩(wěn)定。
4.產(chǎn)品性能參數(shù) 

*酶活定義： 1U 定義為在 25℃， 12h-16h 之內(nèi)， 將 0.5mg 保存于 25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量。  

5.產(chǎn)品使用建議

5.1 25℃酶切條件：
按照酶活性定義，酶切條件舉例：25mM Tris-HCl 8.0 體系中：融合蛋白 0.1-1mg/ml（蛋白總量 50-100μg）重組EK 0.1-0.2U25℃過夜酶切，或完全酶切需 16-24h，用SDS-PAGE檢測酶切效果。
5.2 4℃低溫酶切條件：4℃能對底物進行有效酶切，但需要將酶切時間延長至 48-64h，或增加 2-3 倍酶量。

5.3 酶切優(yōu)化和放大
優(yōu)化：可以對酶切條件進行優(yōu)化，例如緩沖液pH，融合蛋白濃度，EK的量，以及酶切時間，使融合蛋白能在穩(wěn)定條件下被酶切，用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。

5.4 去除重組腸激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制劑親和層析（例如 sigma T0637）去除重組腸激酶。

5.5  注意：不建議 37℃條件下酶切， 可能會有非特異性酶切出現(xiàn)。

6.儲存和運輸穩(wěn)定性

酶液儲存穩(wěn)定性： -20℃， 24 個月穩(wěn)定； 25℃，一周內(nèi)，無活性損失。緩沖體系：50mM Tris-HCl，pH8.0，0.25M NaCl，  50%甘油。酶液反復(fù)凍融穩(wěn)定性：反復(fù)凍融5次，無活性損失。運輸穩(wěn)定性：藍冰保溫運輸，穩(wěn)定。

7．注意事項

在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影響?？蓞⒄找韵峦扑]方法進行酶切：

7.1 為獲得理想酶切結(jié)果，請將樣品透析到 25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中， 再進行酶切。

7.2 若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM 以下， NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即 1U 酶切 500μg 蛋白）。

7.3 如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當(dāng)增加酶量或延長酶切時間，也可達到較好酶切效果。

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